上海天天彩选4

技术文章
上海天天彩选4 >>> 技术文章 >>> 细胞培养中的支原体污染的预防及处理

细胞培养中的支原体污染的预防及处理

  支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的zui小的原核细胞型微生物。自然界分布广泛,种类多,有80余种,分为两个属:一为支原体属(Mycoplasma),有几十个种;另一为脲原体属(Ureaplasma),仅有一种。与人类感染有关的主要是肺炎支原体和解脲脲原体。

     细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明,95%以上是以下四种支原体:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和菜氏无胆甾原体(A.laidlawii),为牛源性。国外调查证明,大约有二十多种支原体能污染细胞,有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。

    支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(某些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染,等等。

    组织细胞培养工作中,可以从以下几方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基冲加入适量的抗生素(antibiotic)。

    抗生素(antibiotic)主要用于消毒培养液,是培养过程中预防微生物污染的重要手段,也是微生物污染不严重时的“急救”方法。不同抗生素(antibiotic)杀灭微生物不同,应根据需要选择。

    在细胞培养过程中如果发现破碎的细胞甚多,培养细胞需要频繁改善营养环境才能支持长期传代培养时,应该怀疑支原体污染。支原体污染难以观察特殊的外观变化,培养液也不浑浊。

     支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体,常用方法有:抗生素(antibiotic)处理、抗血清处理、抗生素(antibiotic)加抗血清和补体联合处理。要注意的是:支原体没有细胞壁(cell wall),故作用于细胞壁(cell wall)生物合成的抗生素(antibiotic),如内酰胺类、万古霉素等是不敏感的;对多粘菌素、利福平、磺胺药物普遍耐火*。对支原体zui有抑制活性抗生素(antibiotic)是四环素类、大环内酯类等,氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小的抑制作用。必要时更换所有培养用物。通常,滤过除菌的方法对支原体是没有作用的。

    由于一些微生物,如支原体,病毒等能通过滤膜,所以过滤药品仍潜在被外源微生物污染的危险,近年来,60Co辐射灭菌技术在医药、食品等领域广泛应用,由于辐射灭菌能够彻底杀灭所有微生物。有试验证实以2Mrad辐射处理的各培养基样品达到了无菌要求,经多批培养试验,辐射灭菌安全可靠;辐射灭菌的培养基营养性能不低于过滤组,证明辐射灭菌对培养基性能无不良影响;对血清的辐射灭菌试验效果也表明60COγ射线不影响培养效果。把干粉培养基经无菌操做定量分装于灭菌容器内,辐射后以干粉原型贮藏,不但培养基的纯净性得到保障,而且营养性能较过滤后以水溶液形式保存更稳定,对谷氨酰胺等这类水溶液不稳定者特别合适。

    目前,有专门做支原体检测的试剂盒,可以用细胞滴片检测。市场上已有了新一代支原体抗生素(antibiotic)M-Plasmocin(InvivoGen公司),能有效的杀灭支原体,又不影响细胞本身的代谢,而且处理过的细胞不会重新感染支原体。另外,配合支原体检测试剂盒(市场上有售,如美国ICN公司的产品),可以帮助尽快发现支原体的污染。

在线客服
电话
15061608254

推荐收藏该企业网站
山东十一运夺金 深圳风彩 幸运飞艇APP 山东十一运夺金 上海天天彩选4 上海天天彩选4 幸运飞艇APP下载 上海天天彩选4 百胜彩票 深圳风彩