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人髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒使用说明书

药品名称:

通用名:人髓过氧化物酶(MPO)酶联免疫分析试剂盒

英文名:Human  MPO  ELISA  Kit

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆、或相关组织液中髓过氧化物酶(MPO)的含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人髓过氧化物酶(MPO)水平。用纯化的人髓过氧化物酶(MPO)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入髓过氧化物酶(MPO),再与HRP标记的羊抗人抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的髓过氧化物酶(MPO)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人髓过氧化物酶(MPO)的含量。

试剂盒组成

1

20倍浓缩洗涤液

30ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品(900U/L)

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

标本处理及要求

1.血清、血浆标本可直接测定;

2.组织:取相关组织1g 于5ml PBS中匀浆,室温孵育5小时(期间不时旋涡混合)后,2000-3000转/分离心10分钟后,取上清液待测。

3.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

4.采集后尽早进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

操作步骤

1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上按序设标准品孔10孔,在、第二孔中分别加标准品100μl,然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;再各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后,在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉;再各取50μl分别加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为 600          U/L,400 U/L ,200 U/L,100 U/L,50 U/L)。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8。洗涤:操作同5。

9。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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