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如何调整人ELISA试剂盒实验的对策

   ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在科研上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,人ELISA试剂盒如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。

下面将操作中各个环节常出现问题解决办法总结于下:

选择试剂:

   选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

标本收集与保存:

   避免使用肉眼可见的溶血标本、高脂标本和混浊标本;2-8℃下,标本可放置24-48小时,长期保存需放置-20℃下。

请避免反复冻融。

试剂盒中会有提示,一般需要准备的有:

   洗涤液;用前配制;有的试剂盒会标明,配好的4度下一般可以放一个月;如果没有标明,尽量用新鲜的,不要多配制。

显色液(有A液和B液的),用前15分钟配制;

   标准品:有的试剂盒中标准品是已经配制好的,4度保存;有的是要现配制的;按照说明书操作;

     浓缩生物素结合的二抗和HRP:如果需要配制,试剂盒没注明配好可以保存多久的话,尽量现配现用(用前15分钟配制); 

   原则是:试剂盒上没有指出配制物的储藏方式的话,应该现配现用;不要怕麻烦;还有小瓶的管子开盖前要离心,以免盖子上粘连以后总量不够。

       加 样:室温温育的试剂,特别是温育时间比较短的实验操作的试剂,加样对数据的影响比较大,特别要注意加样问题。

不好的操作原因:

1、不会正确使用加样器;

2、血清或血浆标本分离不好即进行加样;

3、人ELISA试剂盒手工操作中,加样板过多造成加样後放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);

4、加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

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