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淋巴细胞转化试验技术:形态学检查法

当机体受到抗原的刺激时,T淋巴细胞就可以转化为淋巴母细胞,进一步转化为致敏淋巴细胞。这种转化在一定的程度上代表着机体的细胞免疫功能状态。这种转化也可在体外的T细胞的培养过程中加入适当的刺激原而出现,并表现出形态上的变化。目前常采用PHA诱发的淋巴细胞转化试验作为检查机体细胞免疫的功能状态。具体方法有形态学检查法。

(一)操作方法 
1. 于培养瓶内加0.2ml马血,对照组与试验组各做2瓶,试验组均加PHA 30?g; 
2.37℃培养72h,每天轻摇1~2次; 
3.取出培养瓶,摇散血*,倒入离心管,3 000r/min离心10min,去上清液; 
4.用血球泥制备推片,晾干; 
5.以瑞氏染液染2min~3min,加等量缓冲液,混匀继续染3min,蒸馏水冲洗后再用姬姆萨染液染2min~3min。加等量缓冲染液感作7min~8min,馏水冲洗,晾干; 
6.镜检,观察,计数。 
(二)注意事项 
1.培养液最适pH为7.2~7.4,过酸过碱都会影响细胞的生长而降低转化率。培养液的类型与动物的白细胞有关,如小鼠的淋转试验,用RPMI-1640较好,用199液则不成功。 
2.培养时间 以72h~120h转化率较高,超过这个时间,则转化率反而下降。 
3.吞噬细胞有时在形态上易与“过渡型"混淆。但巨噬细胞有其固有的特点,核占细胞比较小且偏一边,核染色质浓集,细胞浆呈蓝灰色或红褐色,胞浆内有大小不等的颗粒或吞噬物,且含有大小不等的气泡。 
4.涂片要少蘸些细胞,推出尾部来,因淋巴细胞较大,易集中在尾部及边缘。 
5.观察淋巴细胞转化,染色不要太浓,以便观察核仁。 
6.严格的无菌操作,是淋巴细胞转化试验成功的关键。

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